Southern Blotting
Legenda: Detecção de fragmentos específicos de DNA por Southern blotting.
(A) A mistura de fragmentos de DNA de dupla fita gerados pelo seu tratamento com nucleases é separado de acordo com o peso molecular na eletroforese.
(B) Uma folha de papel de nitrocelulose ou papel de nylon é colocado sobre o gel, e os fragmentos de DNA separados são transferidos para a folha pelo blotting. O gel e mantido em um suporte de esponja em um banho de solução alcalina, e o tampão é sugado através do gel e do papel de nitrocelulose pelo papel toalha empilhado em cima da nitrocelulose. De acordo que o tampão é absorvido, os fragmentos de fita simples é transferido do gel para a superfície da folha de nitrocelulose, onde se adere firmemente. Esta transferência e necessária para manter o DNA firme ao local no qual a hibridição acontece.
(C) A folha de nitrocelulose é cuidadosamente retirada do gel. (D) A folha contendo a banda correspondente ao DNA de fita simples está dentro de um saco plastico selado contendo tampão e a sonda, de DNA marcado radioativamente, específica para a sequência de Dna desejada. A folha é exposta por um longo período de tempo à sonda sobre condições favoraveis de hibridização. (E) A folha removida do saco e lavada rigorosamente, somente o DNA hibridizado com a sonda ficara retido no papel. Depois é autoradiografado, o DNA que está hibridizado com a sonda aparecerá como bandas na autoradiografia. Uma adaptação desta técnica para detectar sequências específicas em RNA é chamado de Northern blotting. Neste caso moleculas de mRNA são analisadas em gel de eletroforese e a sonda é usualmente uma fita simples de DNA.
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