PROTOCOLO DE TRANSFERÊNCIA POR SOUTHERN BLOT, DE GÉIS DE AGAROSE

1. Após fotografar, lavar o gel em ddH₂O por 10 minutos.

2. Desnaturar os fragmentos de DNA com solução desnaturante (NaOH/NaCl) por 30 minutos com agitação.

3. Lavar rapidamente com ddH₂O e aspirar.

4. Adicionar solução neutralizante (Tris/NaCl) e deixar por 30 minutos.

Southern Blot (usar luvas novas)

a. Cortar uma membrana de nylon ou nitrocelulose e dois papéis de filtro do tamanho exato do gel, e dois papéis de filtro do tamanho da bucha (esponja) que fica abaixo do gel na transferência, e são todos colocados em 2X SSC .

b. Se prepara o sistema de blot de acordo com a seguinte figura:

obs: deve-se colocar o gel com os buracos para baixo

c. Faz-se a transferência overnight , ~ 18 a 20 horas.

d. Após a transferência, o gel é corado para averiguação.

e. A membrana é colocada entre dois papéis de filtro e se assa a 80ºC por 1 hora.

f. Se procede o protocolo normal de hibridização.