Dosagem de DNA - leitura de A260 e A280
1.
ligar o espectrofotômetro.
2.
dar o pré-aquecimento (pre-heat)
por 30 s e esperar 10 min.
3.
colocar água ou low-TE em uma
cubeta, no primeiro leitor do aparelho.
4.
zerar a 260 e 280 nm, com o
branco, usando água ou TE na cubeta de amostra.
5.
colocar a solução de DNA, na
cubeta de amostra e fazer as leituras.
6.
anotar as absorbâncias e calcular
a razão 260/280 para averiguar a pureza da amostra (valor aproximadamente 2, devido
aos ácidos nucleicos; valor menor que 1.6, provável contaminação por
proteínas).
7.
Para DNA de fita simples (primers) 1 unidade de A260 é igual a 32,7 µg de DNA.