Evolução - Curso: Ciências Biológicas
Aula - mutação: origem e detecção
I) Páginas acessórias para revisão sobre origem das mutações
Origem das mutações (EPM)II) Métodos de detecção da variabilidade genética no DNA
Informação sobre o projeto genoma humano - em inglês
Understanding genetic testing - tutorial em inglês
Why so many mutations in our DNA?
Curiosidades sobre variabilidade genética no DNA humano - página com questões sobre variabilidade genética. Responda às perguntas e faça sua auto-avaliação no final. Neste teste você terá dicas sobre mecanismos de mutações e como estas levam a doenças recessivas e dominantes além de curiosidades sobre variabilidade genética humana (no DNA como um todo, não apenas os genes que são apenas 3% de todo genoma humano).
- Southern-blot - o DNA digerido por enzimas de restrição é separado em eletroforose e transferido para uma membrana de nitrocelulose ou nylon. Posteriormente, utiliza-se de um fragmento de DNA de interesse (SONDA ou probe) marcado com radioatividade para que este revele quais fragmentos de DNA ligados à membrana são homólogos a este. Deste modo, pode-se detectar locos específicos que antes estavam misturados entre todos os fragmentos digeridos separados por ordem de tamanho. Este método produz as impressões digitais de DNA utilizadas em Testes de Identidade.
- Testes de identidade com DNA - são feitos com a utilização de vários métodos, incluindo o DNA fingerprinting através de Southern-blot ou PCR. Permitem a identificação de suspeitos em casos de criminalística ou testes de paternidade. Através desta animação identifique suspeitos e estude casos reais de paternidade em humanos e cavalos.
- Reação em Cadeia da Polimerase - método que permite a amplificação de qualquer região específica do DNA (um gene, uma região repetitiva, etc...) a partir do DNA genômico. Deste modo, pode-se por exemplo obter milhões de cópias do fragmento de DNA de 300 pb dentro do gene CFTR (cujo defeito leva à doença Fibrose Cística). Pode-se analisá-lo posteriormente com digestões de enzimas de restrição e técnicas de eletroforese para detecção da mutação.
- Sequenciamento - baseados no método de Sanger que utiliza ddNTPs (di-desoxinucleotídeo-tri-fosfatos) que impedem a síntese nos respectivos nucleotídeos (ddGTP, ddATP, ddTTP, ddCTP). Assim as reações com ddGTP terão fragmentos de diferentes tamanhos, todos eles com o ddG no final, correspondendo a regiões onde existam Gs no DNA. A análise dos fragmentos em eletroforese, que separa os fragmentos por tamanho, permite a identificação das posições onde estão os Gs. E assim é feito também para os demais nucleotídeos. O método original descrito anteriormente utiliza marcação radioativa enquanto que novos métodos como o da animação (veja o link) utiliza marcação fluorescente e detecção na eletroforese das bandas com o laser. O sequenciador a laser permite que todas as reações (A,C,G,T) sejam corridas em uma única canaleta pois utiliza-se uma cor fluorescente diferente para cada base.
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