Está presente desde eubactéria, até eucariotos superiores (Archeobactérias também possuem uma forma variante da GAPDH) possui uma estrutura muito conservada. A sequência ao redor da Cys do sítio ativo está totalmente conservada. Essa enzima, na via glicolítica, é responsável pela formação do segundo intermediário de alta energia, o que permite que o ATP seja gerado na reação seguinte. É um tetrâmero e cada subunidade possui 2 domínios. O primeiro domínio (resíduos 1-146) liga NAD+ e o segundo liga o gliceraldeído 3-fosfato
O gliceraldeído 3-Fosfato Desidrogenase (GAPDH) é uma enzima comum às vias glicolítica e gliconeogênica. Utiliza como substrato o gliceraldeído 3-fosfato.