DNA Replication Occurs at Discrete Sites in Pseudonuclei Assembled from Purifed DNA In Vitro
Linne S. Cox and Ronald A. Laskey
Cell, Vol. 66, 271-275, July 26, 1991.
Neste artigo os pesquisadores utilizaram a capacidade do extrato de ovos de Xenopus reunir estruturas nucleares de replicação em DNA de fago l purificado. A pergunta é se a organização estrutural dos sítios de replicação do DNA necessitam realmente de seqüências específicas, de estruturas cromossomais ou nucleares pré-existentes.
A literatura cita que os "clusters" de replicação de cromossomos eucariotos podem depender de seqüências específicas presentes no DNA, como origem de replicação; eles ainda refletem a organização estrutural dos cromossomos, sendo hereditária; e são dependentes da organização nuclear matricial.
Em um experimento onde o DNA de bacteriófago l é aplicado em um extrato de pseudonúcleo de ovos de Xenopus, a replicação ocorre semi-conservativamente sobre controle temporal do ciclo celular. As forquilhas de replicação foram visualizadas pela incorporação de biotina-19-dUTP no DNA nascente. Mostrando que a replicação é regulada espacialmente ocorrendo em sítios discretos no DNA do fago.
Este resultado surpreendente demonstra que a organização de forquilhas de replicação formadas em "clusters" discretos, previamente descritos em núcleos eucariotos, não são dependentes de seqüências de DNA eucarióticas específicas, preexistentes em cromossomos ou em estruturas nucleares.